上世紀50年代,科研人員已經把血清添加到培養(yǎng)基中,并且取得了良好的培養(yǎng)效果,但是由于血清成分十分復雜,直至今天,血清中的所有成分仍未完quan分析出來,并且血清成分及含量會隨動物性別、年齡、生理條件的不同而發(fā)生改變?,F階段血清中已明確檢測出含有各種蛋白質、多肽、生長因子、氨基酸、脂類、碳水化合物、無機物、維生素等,這些成分為細胞的正常生長提供了基本的營養(yǎng)物質。
一、血清的分類
血清有多種類型,以牛血清為例,可以劃分為:胎牛血清、新生牛血清、小牛血清、成牛血清。
胎牛血清取自剖腹產的健康胎牛;
新生牛血清取自出生14h內未進食的新生牛;
小牛血清取自出生6月齡以內的健康小牛(企業(yè)內控標準);
成牛血清取自健康的成牛(企業(yè)內控標準)。
因胎牛未接觸外界,血清中抗體、補體等對細胞有害成分最少,故胎牛血清品質高。
二、血清的保存
長期保存建議存放于-15~-20℃環(huán)境中,若無法一次性將1瓶中的血清全部使用完畢,建議將血清分裝到一次性能夠用完的小瓶中,再進行冷凍保存,避免出現反復凍融現象。
血清在放入冷凍環(huán)境前,建議瓶中預留一定的體積空間,避免血清凍結后體積增大,撐破包裝瓶,形成污染。
三、血清的解凍
血清解凍時,先將血清放在2~8℃的冰箱過夜,使之部分融解,然后置于室溫條件下使之完quan融解,在融解過程中需要規(guī)則地搖晃均勻,使血清全部融解。
在做細胞實驗前,建議將完quan融解的血清放置在37℃水浴鍋內預熱,再進行細胞實驗。切勿直接將血清從-15℃放入37℃進行解凍,溫度變化太大,會導致血清中蛋白質凝集析出,出現大量沉淀。
四、沉淀處理
血清正常解凍情況下,可能會出現一些沉淀物,造成這種情況的原因有許多種,但普遍的是由于蛋白質變性造成的。通常這些沉淀物質不會影響血清的品質,如果希望去除這些沉淀物,可以將血清分裝進無菌離心管中,以400g進行離心,離心后將上清液加入培養(yǎng)基內一起過濾即可,不建議以過濾的方式除去這些沉淀物,因為它們可能會堵塞過濾膜。